Molecular cloning and Biochemical characterization of pyridoxal 5’-phosphate dependent enzymes of unknown function

Abstract

General introduction The main topic of this Ph.D. thesis is the characterization of gene products identified as PLP-dependent enzymes with unknown function. A complete and detailed description on function and evolution of PLP-dependent enzymes is provided in chapter 1. Chapter 2 describes the molecular cloning as well as the recombinant expression and the initial biochemical characterization of a threonine synthase homolog from mouse. Finally, in chapter 3 I describe the study of two recombinant human proteins homolog of alanine-glyoxylate amino transferase 2. The last part, Appendix, reports the evaluation of small RNA-cleaving DNAs (ribozymes), chemically modified by means of introduction of monomers of locked nucleic acids (LNA), in order to improve to cleavage of long and structured mRNAs.

Introduzione generale Argomento principale di questa tesi di dottorato è la caratterizzazione di prodotti genici identificati come enzimi PLP-dipendenti, ma aventi funzione ignota. Nel capitolo 1 viene data una introduzione completa e dettagliata sull’evoluzione e le caratteristiche degli enzimi PLP-dipendenti. Nel capitolo 2 sono descritti il clonaggio, l’espressione in forma ricombinante e l’iniziale caratterizzazione biochimica, di una protiena di topo omologa della treonina sintasi microbica. Nel capitolo 3 è illustrato lo studio di due proteine umane, omologhe dell’alanina-gliossilato amino transferasi 2. Nell’ultima parte, l‘Appendice, sono descritti studi su piccoli DNA ad attività ribonucleasica (ribozimi) modificati attraverso l’introduzione di monomeri di locked nucleic acid (LNA), con lo scopo di migliorare il taglio di mRNA dotati di struttura secondaria.