Metodi molecolari per la diagnosi di laboratorio e lo studio epidemiologico delle infezioni da Entamoeba histolytica e da Entamoeba dispar

Abstract

Il riconoscimento su basi genetiche, immunologiche e biochimiche dell’esistenza delle due specie Entamoeba histolytica ed Entamoeba dispar, identiche dal punto di vista morfologico ma con un alto grado di divergenza dal punto di vista biologico (la prima patogena e agente eziologico di amebiasi intestinale ed extraintestinale, importante problema di salute pubblica in termini di morbidità e mortalità a livello mondiale, la seconda in grado di colonizzare l’intestino umano ma non patogena) ha avuto importanti implicazioni sulla diagnosi di laboratorio di amebiasi e sull’epidemiologia di tale malattia. In questa tesi, secondo le raccomandazioni dell’Organizzazione Mondiale della Sanità, sono stati valutati due saggi molecolari per la differenziazione di E. histolytica ed E. dispar al fine di ottenere una pronta ed accurata diagnosi di laboratorio di amebiasi e sono stati condotti uno studio di prevalenza delle infezioni da E. histolytica e da E. dispar nell’area di Parma in un periodo quinquennale e uno studio collaborativo di genotipizzazione comparativa di coppie di ceppi di E. histolytica identificati rispettivamente nelle feci e nel liquido aspirato da ascesso epatico di pazienti con amebiasi intestinale-extraintestinale, al fine di contribuire a chiarire la possibilità che il genotipo del ceppo infettante intervenga nel determinismo della manifestazione clinica dell’infezione.

The classification of Entamoeba histolytica and Entamoeba dispar as separate but not microscopically distinguishable species (the former pathogenic and aetiological agent of intestinal and extraintestinal amoebiasis, problem of great impact on public health in terms of morbidity and mortality, the latter able to colonize human intestine but not pathogenic) has affected both the laboratory diagnosis of amoebiasis and its epidemiology. In this thesis, in light of the recommendations of the World Health Organization, the utility of conventional PCR and real-time FRET PCR as methods for the detection and identification of E. histolytica and E. dispar in clinical samples to routinely diagnose amoebiasis was evaluated. Moreover, the respective proportions of E. histolytica and E. dispar in a non-endemic area (Parma, Italy) in a 5 years-period were estimated. Finally, a collaborative comparative study of genotyping of couples of intestinal and extraintestinal E. histolytica strains belonging to patients with amoebic liver abscess was performed, in order to give a contribution to the comprehension of the possibility that the parasite genotype plays a role in determining the clinical manifestation of the infection.