Identificazione e caratterizzazione dell'allergene Lipid Transfer Protein di pomodoro

Abstract

Le non specific lipid transfer proteins appartengono alla famiglia delle LTP1 e rappresentano le più importanti proteine allergeniche in grado di causare reazioni IgE-mediate nell'area Mediterranea. Sebbene i casi più noti di reazioni avverse alle nsLTPs siano allergie ai frutti di Rosaceae, fra le proteine allergeniche del pomodoro è stata identificata Lyc e 3 (LTP di pomodoro). Inoltre è stato osservato che Lyc e 3 è in grado di conservare la sua reattività immunologica anche a seguito di processi di lavorazione industriale, rendendo quindi i prodotti commerciali a base di pomodoro non sicuri per gli individui sensibilizzati alle nsLTPs. In questo lavoro abbiamo verificato mediante analisi Northern blotting una maggior distribuzione di LTP nella buccia di pomodoro di quattro differenti varietà botaniche ed identificato le relative isoforme, le cui sequenze risultano depositate in banca dati con i codici X56040, AM051296, AM051295, AK224707. Si è proceduto quindi al clonaggio ed espressione in forma ricombinante delle suddette isoforme ai fini della caratterizzazione biochimica ed immunologica. In particolare l'isoforma X56040 è stata purificata mediante cromatografia a scambio cationico e ne sono state studiate le proprietà di legame ed analizzata la struttura secondaria. Tale proteina ha evidenziato proprietà funzionali analoghe a quelle di altre nsLTPs quali per esempio la capacità di legare lisolecitina 1-palmitoil-2-liso-fosfatidilcolina (LisoC16) e la capacità di riacquistare il fold originario a seguito di riscaldamento fino a 105°C a pH acido. La reattività immunologica dell'isoforma X56040 è stata studiata mediante saggi di ELISA inhibition (sistema ISAC), che hanno evidenziato una parziale sovrapposizione degli epitopi riconosciuti dalle IgE localizzati su LTP di pesca e pomodoro. Quindi i dati ottenuti suggeriscono che l'isoforma LTP X56040 caratterizzata possiede caratteristiche biochimiche ed immunologiche riconducibili a quelle delle altre plant nsLTPs.