Sviluppo e applicazione di metodiche molecolari rapide per l'identificazione di agenti patogeni umani

Abstract

Dalla pratica quotidiana, e dalla stretta collaborazione con i medici di diverse specialità, è emersa la necessità e l’interesse, ad approfondire lo studio di due patogeni, Chlamydia trachomatis e Mycoplasma hominis, in gran parte sconosciuti, e di evidenziarne l’importanza clinica ed epidemiologica, adottandoli come oggetto di ricerca. C. trachomatis e del M. hominis sono due agenti patogeni piuttosto diffusi nella popolazione, ma di difficile identificazione e in grado di provocare infezioni a trasmissione sessuale, spesso asintomatiche e latenti, ma con gravi complicanze, sia nell’uomo che nella donna. Alla luce di queste considerazioni, si è deciso di studiare una metodica PCR rapida per l’identificazione di tali patogeni in campioni biologici umani. Il progetto di ricerca ha avuto i seguenti obiettivi: studio e applicazione della normativa regionale per l’Accreditamento Istituzionale di Strutture Sanitarie e per la gestione della qualità UNI EN ISO 9001/2008; progettazione e realizzazione del laboratorio di biologia molecolare; studio degli agenti patogeni C. trachomatis e M. hominis, delle loro caratteristiche biologiche e genetiche; messa a punto, validazione e applicazione di metodiche diagnostiche molecolari rapide (singole e multiplex), competitive e di semplice interpretazione per l’identificazione di tali patogeni da campioni biologici umani, mediante l’impiego di reagenti e tecnologie non convenzionali; studio e verifica dell’applicabilità delle metodiche di PCR rapide anche alla sensibilità/resistenza agli antibiotici dei patogeni oggetto dello progetto. Sono stati analizzati 123 campioni per C. trachomatis e 100 per M. hominis, di cui sono risultati positivi con la PCR rapida il 13% e il 34%, rispettivamente. Per verificare la sensibilità della metodica, gli stessi campioni di DNA per Chlamydia trachomatis sono stati analizzati sia con la PCR rapida che con un kit commerciale in Nested PCR, osservando una maggiore sensibilità e resa della PCR rapida rispetto al kit commerciale, in minor tempo. La PCR rapida è stata associata solo alla rivelazione su gel d’agarosio, ma sarebbe di particolare interesse adattare la metodica ad altri sistemi di rivelazione. Da questa esperienza si evince quello che può essere il contributo del biotecnologo nello specifico contesto del laboratorio di diagnostica medica. Il confronto fra le differenti metodologie di analisi cliniche utilizzate, ha permesso di evidenziarne gli aspetti positivi e negativi, di individuare le possibilità di miglioramento, di ampliarne le eventuali capacità di utilizzo per renderle più innovative e competitive. Per ottenere dei risultati appare indispensabile la collaborazione fra i centri clinici privati, l’industria di settore e l’Università. Da questo studio è emersa anche la necessità di una più attenta e diffusa opera d’informazione sulla necessità della prevenzione delle infezioni da Chlamydia trachomatis e da Mycoplasma hominis mediante l’utilizzo di biotecnologie molecolari nei programmi di screening.