Identificazione di possibili sofisticazioni in preparati commerciali di Origano Mediterraneo ed analisi genetica di Origanum spp. mediante marcatori molecolari genomici: Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) e Sequence Characterized Amplified Region (SCAR)

Abstract

Nel corso del Dottorato è stata sviluppata una procedura di identificazione, basata su marcatori molecolari genomici, delle specie vegetali principalmente rinvenute come adulteranti in preparati commerciali di Origano Mediterraneo, al fine di rendere veloce e trasferibile il processo di autenticazione e certificazione qualitativa della droga. Sono stati definiti i limiti di specificità e sensibilità del metodo, valutando la minima percentuale di contaminanti identificabile. Come metodica di base dell’analisi molecolare si è scelto di utilizzare la tecnica PCR-RAPD, Random Amplified Polymorphic DNA (Williams et al., 1990; Welsh e McClelland 1990). L’analisi effettuata attraverso i marcatori molecolari RAPD presenta considerevoli vantaggi: vengono analizzati marcatori dominanti (caratteristica favorevole nelle indagini interspecifiche); è possibile individuare un elevato numero di polimorfismi; la metodica non richiede l’uso di elevati quantitativi di DNA e conoscenze a priori delle sequenze genomiche in esame. Dall’analisi RAPD-PCR è stata successivamente derivata una seconda categoria di marcatori molecolari genomici altamente riproducibile e trasferibile, definita SCAR, Sequence Characterized Amplified Region (Paran e Michelmore, 1993). Sono state inoltre ottimizzate la procedura di estrazione del DNA genomico a partire da campioni vegetali essiccati e ricchi in composti aromatici e la metodica di amplificazione PCR, al fine di rendere più veloce l’analisi di numeri elevati di campioni.